第32期 CRISPR/Cas9基因编辑技术（包含Base editor 斑马鱼和植物基因）专题研讨会

本期课程安排

第一天上午9:00-12:00  下午13:30-17:00

第一讲、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理

1、基因组靶向修饰技术发展简史（从基因打靶到基因组编辑）   

2、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理

第二讲、CRISPR的设计

1、CRISPR设计的依据及原则    

2、常用CRISPR设计软件简介（CRISPR的在线设计简介）   

3、靶向编辑基因的基因型确认及CRISPR的再设计

第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送   

2、2、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送

第四讲、sgRNA活性验证

1、插入缺失（Indel）突变检测的基本策略  

2、基于胚胎反应器的活性验证方法

3、基于细胞系的活性验证方法

第五讲、利用CRISPR技术创制哺乳动物基因组编辑细胞系

1、基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析    

2、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）   

3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认      

4、基因编辑子的功能确认策略

第二天上午9:00-12:00     下午13:30-17:00

第六讲、利用CRISPR技术创制基因敲除或敲入动物突变体（斑马鱼基因组编辑突变体的创制）

1、RNP基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵  

2、初建者（F0）体细胞携带靶向突变等位基因的鉴定    

3、基因组编辑突变体的筛选及建系（F1）  

4、基因编辑子的功能确认策略  

第七讲  利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物、真菌 和 细菌突变体

1、基本过程     

2、基因组编辑工具的制作    

3、基因组编辑工具的递送      

4、基因组编辑突变体（F1）的筛选及建系     

5、基因编辑子的功能确认

第八讲、CRSIPR/Cas9基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶产生的原因    

2、脱靶检测   

3、解决脱靶问题的方法  

4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

第九讲、CRISPRi或CRISPRa作为转录因子调控基因在细胞或胚胎中的表达

1、dCas9的特征简介  

2、运用CRISPR技术调控基因在细胞或胚胎中表达的基本实验过程   

3、CRISPR技术的转录抑制  4、CRISPR技术的转录活化   

5、碱基编辑技术（Base Editor）   

6、CRISPR技术在（新冠病毒）核酸检测中的应用

第十讲、运用基因组编辑斑马鱼模型评价人突变基因在疾病发生中的作用与机制

1、科学问题的提出    

2、与疾病共分离的遗传突变的常见类型   

3、利用斑马鱼模型解析疾病发生机制研究的一般策略   

4、评价人突变基因的斑马鱼模型的建立（人源化斑马鱼模型、CRISPant敲降）  

5、斑马鱼模型表型模拟人类疾病临床特征（显微形态学和转录组学）及突变基因致病机制解析     

第十一讲 “基因编辑婴儿”事件及CRISPR技术的伦理学规范

1、基因组编辑技术的发展与应用    

2、“基因编辑婴儿”事件   

3、基因组编辑技术的伦理学规范

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