2019全国分子细胞生物学研究方法与实验技能精品培训班（11月北京班）

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授课内容

11月18日

9:00-11:30

理论讲解：

现代分子细胞生物学常用技术原理及其应用概述

1.   分子生物学新技术（核酸提取分离、PCR、测序分析，常用软件snapgene/Primer6等）

2.   细胞生物学常用技术（培养、储存、分离、鉴定、分析等）

实验操作-细胞培养技术

1.  细胞传代、细胞计数、细胞接种、爬片

13:00-17:00

理论讲解：

1. 细胞转染技术（生物转染-病毒、物理转染-显微注射、电转、基因枪、化学转染-阳离子脂质体、阳离子聚合物）

2. 基于细胞培养的基因功能研究方法（基因沉默-siRNA、miRNA、shRNA、基因敲除-ZFN、TALEN、CRISPR、基因过表达-持续性表达、可诱导表达、组织特异性表达）

实验操作：

1.  细胞转染

2.  细胞给药处理

3.  细胞活力检测（MTT、CCK-8、cell-titer blue）

4.  细胞迁移和细胞侵袭实验

5.  细胞流式检测（细胞周期、细胞凋亡、细胞转染效率流式检测）

11月19日

9:00-11:30

理论讲解：高通量测序技术及其应用

1.  一代测序技术、二代测序技术、三代测序技术

2.  基因芯片技术

实验操作：

1.  细胞总RNA提取及鉴定

2.  反转录cDNA合成、实时荧光定量PCR：标准曲线制作、引物设计合成、结果分析

3.  细胞/组织总蛋白提取，亚细胞器总蛋白提取（胞浆蛋白提取、核蛋白提取）

4.  蛋白浓度测定：BCA法测定蛋白浓度

5.  SDS-PAGE：蛋白胶的配置、蛋白电泳分离

6.  Western blot：转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显影、灰度值测定、数据处理

13:00-17:00

理论讲解：

1、 免疫荧光技术及其应用

2、 实时荧光定量PCR技术原理及其应用

3、 数字PCR技术原理及其应用

4、 流式技术原理及其应用

实验操作-免疫荧光技术

1.  细胞爬片

2.  细胞固定

3.  细胞通透

4.  抗体染色